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產品中心
產品詳情
  • 產品名稱: Taq Plus DNA Polymerase(含預混Mg2+的10×Taq Plus Buffer)

  • 產品型號: 500 U,2.5 U/ul
  • 產品廠商:通蔚生物
  • 產品價格:253
  • 產品庫存:120
  • 產品文檔:
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簡單介紹:
Taq Plus DNA Polymerase(含預混Mg2+的10×Taq Plus Buffer)具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和 5’-3’外切核酸酶活性,較弱的 3’-5’外切酶活性。在PCR中,該酶延伸速度為 1 ~ 2 kb/min,產物 3’端帶 A,可直接用 TA 載體克隆。一般用于DNA片段的 PCR 擴增、DNA 標記、引物延伸、序列測定等。
詳情介紹:
產品特點
Taq Plus DNA Polymerase 是從克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經誘導表達后分離純化的,其分子量為 94 KD,經與 Pfu 按一定比例混合而成,該酶可增強擴增的保真性,大大增強擴增的特異性和擴增效率。
Taq Plus DNAPolymerase具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和 5’-3’外切核酸酶活性,較弱的 3’-5’外切酶活性。在PCR中,該酶延伸速度為 1 ~ 2 kb/min,產物 3’端帶 A,可直接用 TA 載體克隆。一般用于DNA片段的 PCR 擴增、DNA 標記、引物延伸、序列測定等。

成分規格

產品組成

規格

Taq Plus DNA polymerase

250U/ 2.5U/μl

10 × Taq Plus Buffer(含 Mg2+)

1m / 2*1 ml

-20℃,有效期 1 年

本產品僅供科研使用 ,不得用于其它用途


使用方法
注 意:以下舉例為常規PCR反應體系和反應條件,實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的調整和優化)
1. PCR 體系:
推薦體系(50μl)

試劑

用量

模板 DNA

< 1μg

10 × Taq  Plus Buffer

5μl

dNTP Mixture(2.5 mM each)

4μl

Primer 1 (10 μM)

2μl

Primer 2 (10 μM)

2μl

Taq Plus DNA Polymerase (2.5 U/μl)

0.5 ~ 1μl

ddH2O

Up to 50μl

A 引物濃度請以終濃度 0.1-1.0μM 作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下,可      提高引物的濃度;發生非特異性反應時,可降低引物濃度,由此優化反應體系。
B 鎂離子濃度請以終濃度 1.5-3mM 作為設定范圍的參考。可根據不同的引物對和模板  來調節鎂離子濃度,由此優化反應體系)

2. PCR 程序

過程

溫度

時間

預變性

94℃

5min

2535cycles

變性

94℃

30sec

退火

55-65

30sec

延伸

72

1kb/30sec

終延伸

72

5min


注 意:
A 一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃,無法得到理想的擴增效率時,適當降低退火溫度;發生非特異性反應時,提高退火溫度,由此優化反應條件。
b 延伸時間應根據所擴增片段大小設定,Taq Plus DNA Polymerase 的擴增效率為1 kb/30 sec。
C 可根據擴增產物的下游應用設定循環數。如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,錯配機率會增加,非特異性背景嚴重。所以,在保證產物得率的前提下,應盡量減少循環次數)
3. 結果檢測:
反應結束后取 5 μl 反應產物,加入適量上樣緩沖液后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。
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